半干轉轉印對濾紙要求較高，要用超厚濾紙，如伯樂厚度2.4mm濾紙（伯樂貨號：1703965）。或者選擇半干轉轉印濾布（貨號：SP1010）
5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液
5×RealBlot Fast Semi-Dry Transfer buffer
● 產品組成：
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貨號
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名稱
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規格
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RT5030
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5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液
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500 ml
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說明書
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一份
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● 產品簡介：
5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液使用獨特配方，使用半干轉法（Semi-dry blot）方法，能在10-20分鐘內高效快速地將蛋白轉移到印跡膜（PVDF膜或NC膜）上。
特點：
環境友好：快速轉膜液可以不使用甲醇，減輕了對實驗者和環境的傷害。
兼容性好：快速轉膜液能兼容Tris-甘氨酸膠，Bis-Tris膠等多種凝膠。
節省時間：快速轉膜液能在10-20分鐘內完成蛋白的轉印。
以每次轉印使用100 ml 1×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液計算，該產品可以使用25次。
● 貯存、效期及運輸：
4-8℃貯存；有效期一年；常溫運輸。
● 使用說明：
轉膜前的準備：
半干轉轉印濾布（貨號：SP1010）或2張半干轉專用超厚濾紙（厚度2.4 mm）；裁好的轉印膜；足夠的1×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液；無水甲醇；無水乙醇。
1. 按照下表配制1×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液：
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加入順序
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組份
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1×快速轉膜液配制量
500 ml
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備注
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1
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5×快速轉膜液
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100 ml
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2
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超純水
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約300 ml
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3
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無水乙醇或者無水甲醇
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100 ml
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兩者選擇其一。用乙醇更環保，用甲醇轉膜效果更好。
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4
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超純水
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定容至500 ml
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注：1.1 按照順序加入各種溶液。如果加入轉膜液后不加水而是加入醇將會產生沉淀。
1.2 配好的轉膜緩沖液4度預冷30-60分鐘再使用，將會大大降低轉膜時的發熱量。
2. 將濾布或濾紙浸泡在1×快速轉膜液中，完全浸濕3-5分鐘。
3. PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕30秒，浸泡在1×快速轉膜液中，平衡5分鐘。NC膜無需處理，直接浸泡在轉膜緩沖液中。
4. 將凝膠在超純水中浸泡漂洗2分鐘，去除膠表面的SDS。
5. 按照順序做好轉印三明治結構：
圖二
5.1 排列順序（圖一）：1 負極（陰極）-2一張超厚濾紙或四層濾布-3 凝膠-4 轉印膜-5一張超厚濾紙或四層濾布-6 正極（陽極）
5.2凝膠在轉印槽中的排列（圖二）：
一板膠盡量排布在轉印槽中間位置；兩板膠把小片段靠近（foot-to-foot）排布在轉印槽中間位置。
6. 用滾輪趕出氣泡。
7. 半干轉推薦使用恒流轉移：
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分子量范圍和凝膠厚度
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一塊小型膠
（7.3×8.5 cm）
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兩塊小型膠（7.3×8.5 cm）
或一塊中型膠（8.5×13.5 cm）
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1.5 mm凝膠
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下列條件基礎上增加5-10分鐘
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下列條件基礎上增加5-10分鐘
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1 mm凝膠
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高分子量
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大于130 kD
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恒流1.3 A，20分鐘
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恒流2.5 A，20分鐘
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混合分子量
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5-130 kD
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恒流1.3 A，15分鐘
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恒流2.5 A，15分鐘
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低分子量
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小于30 kD
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恒流1.3 A，10分鐘
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恒流2.5 A，10分鐘
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注：不同廠家半干轉儀器設置可能有所不同，請根據廠家說明書適當調整。
● 實驗示例：
電泳：4-18%預制膠
電泳：1×TGS 200V 57-23mA 50min
濾紙：2.4mm厚濾紙（Bio-Rad 1703965）
轉印膜：0.22 NC膜（Cat：ML-NC-152022-5）
儀器：Turbo半干轉機器 恒流1.3A 10min
染色：膜麗春紅染色
● 常見問題：
Q1.為什么轉膜后膠上還是有可見的預染Marker或考馬斯亮藍染后膠上有比較多的殘余蛋白？
A1：目前沒有任何一種轉膜方法可以做到100%完全把蛋白從凝膠轉移到膜上，轉移結束后凝膠上總是或多或少地殘留著蛋白。一般說來，快速半干轉可以比較完全地把預染Marker轉移到膜上，然而對目的蛋白轉移來說，或多或少在膠上會有殘余。相對于低分子量蛋白來說，高分子量蛋白在膠上的殘余會更加明顯。如果半干轉轉膜后發現預染Marker在膠上都明顯可見，說明您需要優化轉膜條件。可以延長轉膜時間或/和使用甲醇配制轉膜緩沖液。我們的實驗結果發現，使用甲醇配制轉膜緩沖液至少可以提高20%的轉膜效率（圖三）。
圖三
Q2. 配制1×轉膜緩沖液時，可以使用甲醇代替乙醇嗎？
A2：可以使用甲醇代替乙醇，并且使用甲醇配制的轉膜緩沖液轉膜效率要高于乙醇（圖三）。然而，考慮到甲醇的毒性和環境的不友好，請謹慎選擇是否使用。
Q3. 轉膜緩沖液含有SDS嗎？
A3：轉膜緩沖液中含有SDS，SDS帶負電荷，可以有效提高轉移效率。
Q4. 轉膜結束后發現三明治溫度很高，有燒膠變黃的現象，應當如何避免？
A4：使用推薦的轉膜條件，基本可以避免燒膠現象。如果出現了燒膠現象，可以采用以下方案優化。第一 提前將浸泡有厚濾紙（厚2.4 mm）或濾布的轉膜緩沖液4度預冷30-60分鐘。第二 盡量不要使用多層疊加放置的薄濾紙（一般濕轉用的濾紙厚度會低于1 mm），它們吸水和保水能力較弱，在高電流的轉膜條件下緩沖液很容易揮發殆盡，導致燒膠現象。第三 如果無奈使用多層薄濾紙進行半干轉實驗，建議縮短轉膜時間，然而會導致轉膜效率降低，膠上殘余較多。
Q5. 5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液能用于伯樂Trans-Blot
SD Semi-Dry Electrophoretic Transfer Cell嗎？
A5：伯樂的SD系統是老式半干轉系統，5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液與其不兼容，不建議使用。
Q6. 5×RealBlot快速半干轉轉膜緩沖液適用于哪些半干轉機器？
A6. 目前已經測試的機器列表如下：
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公司
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儀器名稱
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備注
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伯樂 Bio-Rad
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Trans-Blot Turbo Transfer
System
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可以平替伯樂配套緩沖液Trans-Blot Turbo 5× Transfer Buffer(貨號10026938)
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賽默飛Thermo
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Pierce G2 Fast Blotter
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可以平替Pierce 1-Step Transfer Buffer 1×(貨號84731)
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賽默飛Thermo
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Power Blotter Systym
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可以平替Power Blotter 1-Step Transfer Buffer,
5× concentrate(貨號PB7300)
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Power Blotter XL Systym
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北京鴻濤基業
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HT-1000TBT 全能型半干轉印系統
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可以配套
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廣州道一
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FTB95 藍箭快轉儀
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可以平替廠家配套的快速半干轉緩沖液
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常州ACE
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S-TRANS快速多通道半干轉印儀
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可以平替；廠家采用陰陽極轉膜緩沖液
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北京韋克斯
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WIX-fastBLOT 快速轉印系統
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可以配套
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北京龍方
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LF-GZY02型半干轉印電泳槽
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可以配套
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