Bradford蛋白濃度測定試劑盒
|
名稱
|
貨號
|
規格
|
|
Bradford蛋白濃度測定試劑盒
|
RTP7101
|
1000次（微孔板）
|
● 試劑盒內容及保存：
|
貨號
|
產品名稱
|
包裝
|
貯存方式
|
|
RTP7101-01
|
考馬斯亮藍G-250染色液
|
200
ml
|
4℃
|
|
BSA-01
|
牛血清白蛋白(BSA)標準溶液（5 mg/ml）
|
2×1 ml
|
-20℃
|
|
RT0280-02
|
PBS溶液
|
10
ml
|
4℃
|
|
|
說明書
|
1份
|
|
● 儲存條件和效期：
考馬斯亮藍G-250染色液4℃避光保存；牛血清白蛋白標準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。試劑盒常溫運輸；本試劑盒有效期1年。
● 產品簡介：
Bradford蛋白質濃度測定試劑盒是根據考馬斯亮藍G-250（Coomassie
brilliant blue G-250）法研制而成，其原理是考馬斯亮藍G-250在酸性條件下和蛋白質結合，使得染料最大吸收峰從465 nm變為595 nm，在一定的線性范圍內，反應液595 nm處吸光度的變化量與反應蛋白量成正比，測定595 nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。
每個試劑盒可以檢測1000個樣品（使用微孔板）或60個樣品（使用試管）
● 產品特點：
1.
檢測速度極快，10個樣品只需不足10分鐘即可完成。
2.
靈敏度高，檢測濃度下限可達25
μg/ml （測定濃度范圍在25-1000 μg/ml內有較好的線性關系，最佳測定濃度范圍為50-750
μg/ml），最小檢測蛋白量可達0.5
μg，待測樣品體積為1-20 μl。
3.
Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1
M，DTT的濃度可高達5
mM。然而，此方法測定蛋白濃度受高濃度的去垢劑影響，故不能適用膜蛋白樣品的濃度測定。需確保測定樣品中SDS濃度低于0.01%，Triton
X-100濃度低于0.05%，Tween
20, 60, 80濃度低于0.015%。測定含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（RTP7102）。
● 操作方法
微孔板測定程序：（最優工作范圍50-750 μg/ml）
1． G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和顛倒混勻；
2． 1 mg/ml蛋白標準品配制：常溫完全溶解蛋白標準品，取25 μl 5mg/ml BSA蛋白標準溶液，加入100 μl PBS溶液，使其終濃度為1 mg/ml。
3． 按照下表配制BSA標準測定溶液，建議做3個重復：
|
編號
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
|
|
1 mg/ml BSA標準溶液 μl
|
|
BSA標準溶液 μl
|
0
|
1
|
1.5
|
2
|
3
|
6
|
10
|
15
|
|
PBS 溶液 μl
|
20
|
19
|
18.5
|
18
|
17
|
14
|
10
|
5
|
|
BSA終濃度 μg/ml
|
0
|
50
|
75
|
100
|
150
|
300
|
500
|
750
|
|
總體積
|
20 μl
|
4． 將適當體積的待測樣品加入到微孔板中，并用PBS補足到20 μl；
5． 向微孔板中加入200 μl G-250染色液，混勻，室溫放置5分鐘；
6． 測定595 nm 處的吸光值，并記錄讀數；以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照。
7． 以BSA含量為縱坐標A595讀數為橫坐標，繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內，請稀釋樣品后重新測定。
試管測定程序：（最優工作范圍50-750 μg/ml）
1. G-250染液在使用前應平衡溫度至室溫并溫和顛倒混勻；
2. 1mg/ml蛋白標準品配制：室溫完全溶解蛋白標準品，取360 μl 5mg/ml BSA蛋白標準溶液，加入1440 μl PBS溶液，使其終濃度為1.0 mg/ml。
3. 按照下表配制BSA標準測定溶液，建議做3個重復：
|
編號
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
|
|
1 mg/ml BSA標準溶液 μl
|
|
BSA標準溶液 μl
|
0
|
10
|
15
|
20
|
30
|
60
|
100
|
150
|
|
PBS 溶液 μl
|
200
|
190
|
185
|
180
|
170
|
140
|
100
|
50
|
|
BSA終濃度 μg/ml
|
0
|
50
|
75
|
100
|
150
|
300
|
500
|
750
|
|
總體積
|
200 μl
|
4. 將適當體積的待測樣品加入到試管中，并用PBS補足到200 μl；
5. 向試管中加入3ml G-250染色液，混勻，室溫放置3-5分鐘；
6. 測定595
nm 處的吸光值，并記錄讀數；以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對照。
7. 以BSA含量為縱坐標A595讀數為橫坐標，繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內，請稀釋樣品后重新測定。
實驗示例：
引用RTP7101 Bradford蛋白濃度測定試劑盒發表文章
使用該產品發表部分文章列表：
1. [2013 IF=3.5] Identification of Novel
Surface-Exposed Proteins of Rickettsia rickettsii by Affinity Purification and
Proteomics.
Author: Wenping Gong, Xiaolu Xiong, Yong Qi, Jun Jiao, Changsong
Duan, Bohai Wen
Journal: Plos One. June 2014 | Volume 9 |
Issue 6 | e100253
Institution： State Key Laboratory of
Pathogen and Biosecurity, Beijing Institute of Microbiology and Epidemiology
Paper link： https://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0100253