15% RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預(yù)制膠
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名稱
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貨號
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規(guī)格
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15% RealPAGE
TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預(yù)制膠
（12孔）
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RTH5102-0015
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10板/盒
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● 產(chǎn)品介紹：
RealPAGE TBE-尿素-PAGE核酸變性電泳預(yù)制膠適用于 10-1000 個堿基長度的單鏈 DNA或 RNA的分析和純化，可用于合成寡核苷酸分析和純化、RNA 酶保護實驗、體外轉(zhuǎn)錄研究和 RNA 印跡實驗等。是一款安全、快捷、高性能的預(yù)制凝膠，即開即用無需自行配置各種試劑及灌膠操作，采用全自動化灌膠技術(shù)，大大降低批間差異。核酸條帶均一性好，分辨率高。兼容市場上主流的 mini 電泳槽， 如
Bio-Rad，天能，六一和君意東方等。
產(chǎn)品參數(shù)：
預(yù)制膠板尺寸：長 9.8 cm，寬8.4 cm，厚度為4.1
mm
預(yù)制膠尺寸：長 8.1 cm，寬
7.4 cm，厚度為1.1 mm
梳孔：12 孔
包裝規(guī)格：10板/盒
最大上樣量：30 μl（12 孔）
● 產(chǎn)品貨號及選擇：
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貨號
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分離膠濃度
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孔數(shù)
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最大上樣量
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電泳緩沖液
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最佳分離范圍
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溴酚藍位置
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RTH5102-0005
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5%
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12
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30 μl
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1×TBE
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200-1000 nt
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~35 nt
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RTH5102-0010
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10%
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12
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30 μl
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1×TBE
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25-350 nt
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~15 nt
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RTH5102-0015
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15%
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12
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30 μl
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1×TBE
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10-150 nt
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~10 nt
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● 貯存、效期及運輸：
預(yù)制膠4-8℃貯存，切勿置于0oC以下冷凍；有效期30天；常溫運輸。
● 使用說明：
一. 樣品準備：
1.1單鏈DNA樣品加入等體積的2×TBE尿素上樣緩沖液（用于尿素變性膠）（貨號：DL080）；RNA樣品加入等體積的2×RNA上樣緩沖液 (尿素變性膠，RNase-free) （貨號：RTE4103-05）；70℃孵育5分鐘以充分變性核酸以打開核酸的二級結(jié)構(gòu)，立即置于冰水浴中。 建議每孔上樣0.2-0.5 μg左右即可。
1.2 TBE-尿素-PAGE電泳可以選擇單鏈DNA Marker（25-75
nt）（貨號：RTM501）或單鏈DNA
Marker （15-120nt）（貨號：RTM506）或單鏈DNA Marker（10-75
nt）預(yù)混型（貨號：RTM 508）作為分子量標準。
二. 電泳液的準備：
取 5×TBE（貨號：TB001），加入去離子水稀釋為1×，制備成 1×TBE buffer。對于RNA樣品電泳，取5×TBE（RNase-free）（貨號：TB001F），加入RNase-free水/DEPC水（貨號：RF001-02）稀釋為 1×，制備成 1×TBE buffer。
1×TBE電泳緩沖液配制方法
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終濃度
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順序
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原料
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1升
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5 升
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89 mM
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1
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Tris堿 [MW121.14]
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10.8 克
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54克
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2 mM
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2
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EDTA 2Na·2H2O [MW372.24]
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0.744 克
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3.72克
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89 MM
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3
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硼酸 [MW61.83]
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5.5 克
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27.5克
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4
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超純水最后定容至
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1 升
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5 升
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最后pH在8.2-8.3之間，可以不用調(diào)節(jié)pH，記錄每批pH
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三. 電泳：
3.1 將預(yù)制膠從包裝袋中取出，裝入兼容的電泳槽中，加入電泳緩沖液，再緩慢地將梳子拔出。
注：伯樂Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列電泳槽請確保密封條的安裝方向（下圖）。
六一其他系列，君意東方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI，Hoefer Mighty Small (SE 250/ SE 260/ SE 280)等電泳槽可以直接使用預(yù)制膠。不兼容Thermol系列電泳槽。
3.2內(nèi)槽加滿電泳液，外槽加入電泳液沒過電泳槽底部的陽極即可，用1×TBE緩沖液徹底沖洗加樣孔2-3次，去除殘余的尿素。
3.3 上樣：在梳孔內(nèi)加入適當濃度和體積的樣品。
注：最佳上樣量須通過實驗來確定，樣品過量較易導(dǎo)致條帶拖尾。
3.4 將電泳槽蓋子蓋好，并將電源線插頭插入電泳儀電源插孔(紅對紅，黑對黑)。一般在150V電壓，電泳50-90分鐘，根據(jù)溴酚藍的位置大體判斷條帶大小位置，停止電泳。
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恒電壓
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起始電流
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結(jié)束電流
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電泳時間
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適用條件
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推薦電壓
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150V
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15-20 mA/板膠
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5-10 mA/板膠
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60+ min
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最佳電壓，最優(yōu)的分辨率
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變性膠濃度
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溴酚藍
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二甲苯菁
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5%
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~35 nt
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~130 nt
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10%
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~15 nt
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~55 nt
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15%
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~10 nt
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~52 nt
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3.5 取出玻璃膠板，稍加用力慢慢扳開或用刮板輕輕撬開玻璃膠板，將凝膠取出。
四. 染色：
單鏈DNA或RNA樣品可以用單鏈DNA PAGE電泳染色試劑盒（貨號：RTS5103），核酸PAGE電泳染色試劑盒（貨號：RTS5102）或核酸快速高靈敏度染色試劑盒（貨號：RTS5101）染色均可以得到清晰的條帶分離效果。注：如果使用核酸染料染色，RealSafe Red（貨號：GR002）或RealSafe All（貨號：GR004）核酸染料結(jié)合單鏈核酸效果最佳，強烈建議使用以便獲得最佳效果的膠圖。其余染料如GelRed，Goldview，EB等染色效果不好。
以下程序用RealSafe Red核酸染料(貨號:GR002)進行染色。
4.1
漂洗：拆下凝膠后，適量蒸餾水漂洗3-5分鐘。
4.2
染色液配制：
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即用型RealSafe Red核酸染色液配制
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1×TBE
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RealSafe Red核酸染料
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10-20 μl
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4.3 染色：
凝膠浸泡于即用型染色液中，常溫避光搖床40-60 rpm 染色30 分鐘。
4.4 觀察：
紫外燈或藍光儀上觀察條帶。
● 實驗示例：
